胶体金层析法检测雌酮硫酸钠的试纸条
1. 一种胶体金层析法检测雌酮硫酸钠的试纸条，其特征在于包括底板、样品吸收垫、金标抗体结合垫、硝酸纤维素膜和吸水滤纸；在底板的中部顶端固定连接有硝酸纤维素膜，在硝酸纤维素膜的中部沿径向分别划有相平行的检测线和质控线，在硝酸纤维素膜的左部上端固定连接有金标抗体结合垫，在金标抗体结合垫的左部上端固定连接有样品吸收垫，在硝酸纤维素膜的右部上端固定连接有吸水滤纸。
2. 根据权利要求1所述的胶体金层析法检测雌酮硫酸钠的试纸条，其特征在于检测线按下述方法得到：第一步，精密称取6.6mg雌酮硫酸钠-17-肟置反应瓶中，在反应瓶中加入1mlN,N-二甲基亚酰胺溶解在雌酮硫酸钠-17-肟中，溶解后加入2.0ml二氧六环混匀，在温度为4℃下放置30min，后加入23.2μl三正丁胺并搅拌反应30min，反应后加入17.4μl氯甲酸已丁酯混匀后得到活化溶液（A）；第二步，精密称取98.5mg牛血清白蛋白，在牛血清白蛋白中依次加入5ml浓度为0.01mol·L-1 、pH为7.4的磷酸盐缓冲液和2ml二氧六环并均匀，在温度为4℃下放置30min后得到溶液（B）；第三步，将活化溶液（A）加入溶液（B）中并搅拌均匀，调节pH值为8.0至9，在温度为4℃下继续搅拌反应18h，反应完成后将反应液转移入透析袋，置于温度为4℃下、浓度为0.05 mol·L-1 、 pH为7.4的碳酸盐缓冲液中透析10h至24h，透析后得到结合比为1:24的人工抗原；第四步，将人工抗原和弗氏完全佐剂等体积乳化后得到初次免疫剂，人工抗原和弗氏不完全佐剂等体积乳化后得到加强免疫剂，选择体重为1.8kg至2.1kg的新西兰白雄兔，对新西兰白雄兔采用背部皮下多点注射法进行一次初次免疫和三次加强免疫，初次免疫用初次免疫剂，初次免疫剂的剂量为0.8mg/只兔，初次免疫后再进行三次加强免疫，加强免疫用加强免疫剂，加强免疫剂的剂量为0.40mg/只兔，每次免疫时间间隔为1周至2周，最后一次免疫完成10天后对新西兰白雄兔采血收集血清，用ELISA法测定抗血清的效价，待抗血清的效价达到1:20000后，采取兔心脏采血法获取全血，全血析出血清后，在血清过蛋白A亲和层析柱纯化后，加入体积百分比为0.01%的硫柳汞水溶液1ml至3ml混匀后得到抗雌酮硫酸钠特异性抗体；第五步，通过微量进样器在硝酸纤维素膜上用抗雌酮硫酸钠特异性抗体划线包被得到检测线。
3. 根据权利要求2所述的胶体金层析法检测雌酮硫酸钠的试纸条，其特征在于检测线的宽度为1mm至1.5mm，检测线的点样量按0.5cm宽的试纸条上点样1.5ul。
4. 根据权利要求1或2或3所述的胶体金层析法检测雌酮硫酸钠的试纸条，其特征在于质控线按下述方法得到：通过微量进样器在硝酸纤维素膜上用浓度为1.0mg/m1的羊抗兔IgG划线包被得到质控线。
5. 根据权利要求1或2或3所述的胶体金层析法检测雌酮硫酸钠的试纸条，其特征在于将划有检测线和质控线的硝酸纤维素膜用封闭液在37℃下浸泡封闭30分钟后自然风干；其中：封闭液包括磷酸盐缓冲液、牛血清白蛋白和Tween20，磷酸盐缓冲液为浓度为0.01mol·L-1 、pH为7.4的磷酸盐缓冲液，牛血清白蛋白在封闭液中的质量百分比为1%，Tween20在封闭液中的质量百分比为0.1%。
6. 根据权利要求4所述的胶体金层析法检测雌酮硫酸钠的试纸条，其特征在于将划有检测线和质控线的硝酸纤维素膜用封闭液在37℃下浸泡封闭30分钟后自然风干；其中：封闭液包括磷酸盐缓冲液、牛血清白蛋白和Tween20，磷酸盐缓冲液为浓度为0.01mol·L-1 、pH为7.4的磷酸盐缓冲液，牛血清白蛋白在封闭液中的质量百分比为1%，Tween20在封闭液中的质量百分比为0.1%。
7. 根据权利要求2或3或6所述的胶体金层析法检测雌酮硫酸钠的试纸条，其特征在于金标抗体结合垫按下述方法得到：第一步，把氯金酸加入超纯水中配成质量百分比浓度为0.01%的氯金酸水溶液，将氯金酸水溶液煮沸后每100ml加入质量百分比为1%的柠橡酸三钠水溶液3ml，继续煮沸2min，待冷却至室温后用浓度为0.1mol·L-1的K2CO3调至PH为8.2后得到胶体金溶液；第二步,在100ml胶体金溶液中加入600μg抗雌酮硫酸钠特异性抗体搅拌10min后得到第一混合液，搅拌后在温度为4℃下静置45min，然后加入牛血清白蛋白搅拌10min后得到第二混合液，牛血清白蛋白在第二混合液中的体积百分比浓度为1%，将第二混合液12000rpm离心5min，吸去上清后所得沉淀即为胶体金标记抗雌酮硫酸钠特异性抗体；第三步, 按每4mg的胶体金标记抗雌酮硫酸钠特异性抗体中加入1ml的蒸馏水进行稀释，稀释后按30μl/cm2的量均匀喷涂于玻璃纤维素膜上，在温度为-20℃下、真空度为200Pa下冷冻真空干燥后得到金标抗体结合垫。
8. 根据权利要求4所述的胶体金层析法检测雌酮硫酸钠的试纸条，其特征在于金标抗体结合垫按下述方法得到：第一步，把氯金酸加入超纯水中配成质量百分比浓度为0.01%的氯金酸水溶液，将氯金酸水溶液煮沸后每100ml加入质量百分比为1%的柠橡酸三钠水溶液3ml，继续煮沸2min，待冷却至室温后用浓度为0.1mol·L-1的K2CO3调至PH为8.2后得到胶体金溶液；第二步,在100ml胶体金溶液中加入600μg抗雌酮硫酸钠特异性抗体搅拌10min后得到第一混合液，搅拌后在温度为4℃下静置45min，然后加入牛血清白蛋白搅拌10min后得到第二混合液，牛血清白蛋白在第二混合液中的体积百分比浓度为1%，将第二混合液12000rpm离心5min，吸去上清后所得沉淀即为胶体金标记抗雌酮硫酸钠特异性抗体；第三步, 按每4mg的胶体金标记抗雌酮硫酸钠特异性抗体中加入1ml的蒸馏水进行稀释，稀释后按30μl/cm2的量均匀喷涂于玻璃纤维素膜上，在温度为-20℃下、真空度为200Pa下冷冻真空干燥后得到金标抗体结合垫。
9. 根据权利要求5所述的胶体金层析法检测雌酮硫酸钠的试纸条，其特征在于金标抗体结合垫按下述方法得到：第一步，把氯金酸加入超纯水中配成质量百分比浓度为0.01%的氯金酸水溶液，将氯金酸水溶液煮沸后每100ml加入质量百分比为1%的柠橡酸三钠水溶液3ml，继续煮沸2min，待冷却至室温后用浓度为0.1mol·L-1的K2CO3调至PH为8.2后得到胶体金溶液；第二步,在100ml胶体金溶液中加入600μg抗雌酮硫酸钠特异性抗体搅拌10min后得到第一混合液，搅拌后在温度为4℃下静置45min，然后加入牛血清白蛋白搅拌10min后得到第二混合液，牛血清白蛋白在第二混合液中的体积百分比浓度为1%，将第二混合液12000rpm离心5min，吸去上清后所得沉淀即为胶体金标记抗雌酮硫酸钠特异性抗体；第三步, 按每4mg的胶体金标记抗雌酮硫酸钠特异性抗体中加入1ml的蒸馏水进行稀释，稀释后按30μl/cm2的量均匀喷涂于玻璃纤维素膜上，在温度为-20℃下、真空度为200Pa下冷冻真空干燥后得到金标抗体结合垫。
10. 根据权利要求7或8或9所述的胶体金层析法检测雌酮硫酸钠的试纸条，其特征在于硝酸纤维素膜上的抗雌酮硫酸钠特异性抗体的物质的量和金标抗体结合垫上的胶体金标记抗雌酮硫酸钠特异性抗体的物质的量相等。
